摘要:摘要:目的?采用2种重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术将5种立克次体目的基因片段进行融合，同时对2种方法进行比较。方法?采用一步法及两步法融合基因技术，对5种立克次体融合基因进行构建，并优化一步法中重叠引物浓度以及两步法中各靶基因产物加入量，以提高2种方法的融合效率。结果?成功建立5种立克次体融合基因。一步法基因融合过程中重叠引物浓度在0.1～0.01 μmol/L时，912 bp的融合基因条带亮度较高，且杂带较少；两步法基因融合过程中各靶基因产物加入量为0.1～0.25 μL时，912 bp的融合基因条带亮度较高，且杂带较少。结论?一步法基因融合技术操作简单、耗时短且耗材少，在掌控好退火时的温度及时间的情况下是一种经济、方便且高效的融合技术。为后续进行立克次体融合基因表达载体构建以及立克次体分子生物学多重检测提供实验模板。

摘要:摘要:目的?探讨低深度全基因组拷贝数变异测序(copy number variation sequencing, CNV-Seq)与核型分析技术在检测产前孕中晚期胎儿生长受限(fetal growth restriction, FGR)染色体异常中的临床诊断价值。方法?对2018年4月至2020年10月因FGR行侵入性产前诊断分析的138例胎儿同时进行G显带核型分析和全基因组CNV-Seq检测，结合短串联重复序列(STR)检测鉴别母体污染。结果?138例FGR病例中，采用G显带核型分析检出>10 Mb染色体异常12例(8.7%,12/138)，采用CNV-Seq检出9例(6.5%，12/138)>10 Mb染色体异常，2例平衡易位和1例低比例嵌合体。G显带核型分析检出<10 Mb染色体异常1例，CNV-Seq额外检出<10 Mb染色体CNVs 11例(8.0%,11/138)，其中8例为致病性CNVs(包括2例Williams-Beuren综合征、2例16p微缺失/微重复综合征、1例为Miller-Dieker综合征、1例Wolf-Hirschhorn综合征、1例3q29缺失综合征和1例父源单亲二倍体)，3例为临床意义不明拷贝数变异(variants of uncertain significance, VOUS)。结论?与传统G显带核型分析相比较，CNV-Seq除可有效检出产前FGR中>10 Mb且涉及CNVs的染色体数目和结构异常外，还可额外检出核型正常FGR中<10 Mb的染色体CNV，可更系统全面地揭示产前FGR的遗传学病因，科学指导FGR胎儿妊娠选择。

摘要:摘要：目的?探讨高通量测序技术(next generation sequencing，NGS)在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid cancer，PTC)相关的15个靶基因变异检测中的应用价值。方法?收集2019年1月至2020年6月就诊的188例PTC患者手术切除的癌组织石蜡包埋标本，采用NGS技术检测其中15个目标基因；利用GATK 4.0.2.0、VarScan.v2.3.9和 Factera 1.4.4软件分析基因变异的特点。结果?共计80.32%(151/188)的标本检出突变。其中74.47%(140/188)的标本检出1个点突变或基因融合突变，5.32%(10/188)的标本同时检出2个点突变，0.53%(1/188)的标本同时检出3个点突变。151例突变标本中共检出点突变及基因融合突变163个，其中BRAF基因检出率最高。在所有双突变的标本中，2个不同突变等位基因突变丰度基本一致。在3个基因同时发生突变的标本中，TERT和NRAS基因等位基因突变丰度基本一致，而TP53基因等位基因突变丰度显著低于其他2个基因。PTC患者基因突变与性别(χ2=0.585，P>0.05)、年龄(χ2=0.575，P>0.05)及临床分期(χ2=0.711，P>0.05)均无关。结论?NGS技术检测PTC相关基因突变位点具有经济、效率高和可定量的优势，可为患者的诊断、预后和个体化治疗提供依据。

摘要:摘要：目的?探索长链非编码RNA(LncRNA) DCST1-AS1结合果糖二磷酸醛缩酶A(fructose-bisphosphate aldolase A, ALDOA)对三阴性乳腺癌细胞(MDA-MB-231)侵袭的影响。方法?采用RNA pulldown试验、质谱分析和RNA免疫共沉淀试验检测并分析DCST1-AS1与ALDOA之间的相互作用；采用癌症基因组图集(The Cancer Genome Atlas，TCGA)中的侵袭性乳腺癌阵列分析DCST1-AS1与ALDOA表达的相关性；RT-PCR和western blot分析三阴性乳腺癌细胞中DCST1-AS1失调对ALDOA表达的影响；Transwell试验分析DCST1-AS1结合ALDOA对乳腺癌侵袭能力的影响。结果?DCST1-AS1在乳腺癌细胞内与ALDOA直接结合。ALDOA在TCGA乳腺癌阵列中高表达(P<0.01)，并与DCST1-AS1的表达呈正相关(r=0.19，P<0.01)。与阴性对照组相比，干扰ALDOA能抑制DCST1-AS1对MDA-MB-231细胞的促侵袭功能。结论?DCST1-AS1通过与ALDOA直接结合促进三阴性乳腺癌细胞的侵袭。

摘要:摘要:目的?检测骨肉瘤患者血清外泌体长链非编码RNA(LncRNA) H19的表达水平，分析其与患者临床病理参数的关系，探讨其在骨肉瘤诊断中的价值。方法?采用实时荧光定量RT-PCR分别检测46例骨肉瘤患者及50例体检健康者血清外泌体LncRNA H19的表达水平；采用ELISA法检测各组血清中基质金属蛋白酶9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)、胰岛素样生长因子2(IGF-2)的表达水平；分析血清外泌体LncRNA H19表达水平与骨肉瘤患者临床病理参数的相关性；绘制ROC曲线，并分析血清外泌体LncRNA H19对骨肉瘤的诊断价值。结果?血清外泌体LncRNA H19的表达水平与骨肉瘤患者的病程及是否发生远处转移相关，差异有统计学意义(P均<0.01)，而与患者的性别、年龄、居住地及发病部位均无显著相关性(P均>0.05)；骨肉瘤患者血清外泌体中LncRNA H19的表达水平显著高于健康人对照组(P<0.01)；血清外泌体LncRNA H19诊断骨肉瘤的ROC曲线下面积(AUCROC) 为 0.881，敏感性为87.2%，特异性为75.6%，均高于其余各单项指标组。结论?外泌体高表达的LncRNA H19可能成为骨肉瘤诊断、靶点的个体化治疗及疗效监测的生物学标志物。

摘要:摘要:目的?利用全外显子测序技术寻找1例智力障碍合并癫痫及运动障碍患者的遗传学病因，并探究其致病机制。方法?提取患儿及父母双方的外周血DNA，使用外显子测序技术寻找患儿的致病基因，并使用Sanger测序验证致病位点。利用小鼠cDNA诱导克隆该致病基因并构建质粒，采用western blot检测致病基因蛋白与野生型蛋白的表达情况。结果?全外显子测序检测发现该患者PRRT2基因存在无义突变(c.649C>T;p.R217X)，遗传自母亲；Sanger测序验证结果与外显子捕获测序结果相一致。western blot证实小鼠PRRT2?R223X突变蛋白(对应人PRRT2 R217X)不能正常表达。结论?PRRT2基因c.649C>T突变可能是该例患者智力障碍的致病原因。突变的PRRT2?R217X蛋白不能正常表达。

摘要:摘要：目的?检测小核核糖核蛋白多肽A(SNRPA)在胃癌组织和胃癌细胞系中的表达，分析SNRPA调控锌指转录因子1(Snail1)对人胃癌细胞系增殖、迁移和侵袭的影响。方法?通过对GAPIA数据库进行检索以及western blot验证，以确定SNRPA在胃癌组织中的表达情况，并对患者临床病理参数进行统计学分析。进一步检测胃癌细胞系AGS、HGC27、SGC7901、BGC823和MGC803中SNRPA蛋白及mRNA的表达水平。在胃癌细胞系AGS和SGC7901中分别转染SNRPA siRNA和SNRPA过表达质粒，采用CCK8及EdU细胞增殖试验检测转染后细胞的增殖活性；Transwell细胞迁移和侵袭试验检测细胞迁移能力；western blot检测相应蛋白质的表达；敲减Snail1后进一步验证SNRPA调控Snail1介导胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。结果?SNRPA在胃癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05)。此外，在AGS细胞系中SNRPA的表达水平最高，而在SGC7901细胞系中SNRPA的表达水平最低。在AGS细胞系中，敲减SNRPA后，其细胞增殖活性显著低于阴性对照组(P<0.05)，且细胞迁移和侵袭能力明显降低(P<0.05)，Snail1蛋白的表达水平明显降低(P<0.05)。在SGC7901细胞系中，转染SNRPA过表达质粒后，其增殖活性明显高于阴性对照组(P<0.05)，细胞迁移和侵袭能力明显增高(P<0.05)，Snail1蛋白的表达水平明显升高(P<0.05)。在AGS细胞系中，转染Snail1 siRNA后，其细胞增殖活性明显低于阴性对照组(P<0.05)，细胞迁移和侵袭能力明显降低(P<0.05)。而在SGC7901细胞系中，SNRPA过表达质粒和Snail1 siRNA共转染后，与对照组相比，其细胞增殖活性、细胞迁移和侵袭能力差异均无统计学意义(P>0.05)。结论?SNRPA在胃癌组织中高表达；SNRPA通过上调Snail1表达促进胃癌细胞增殖、迁移和侵袭。

摘要:摘要：目的?探究慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并冠心病(CHD)患者血清miR-145、miR-146a的表达水平及临床意义。方法?收集2014年至2019年本院就诊的COPD稳定期患者96例，以COPD稳定期合并CHD患者38例作为COPD+CHD组，COPD稳定期未合并CHD患者58例作为COPD组，另选取同期在本院体检健康者45例作为健康人对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组血清miR-145、miR-146a的表达水平，并分析其与C反应蛋白(CRP)、纤维蛋白水平、肺功能、血气指标及Gensini评分关系。结果?健康人对照组、COPD组、COPD+CHD组血清miR-145(1.01±0.32 vs 0.73±0.25 vs 0.47±0.14)、miR-146a(0.99±0.28 vs 0.81±0.21 vs 0.45±0.13)的表达水平依次降低，差异有统计学意义(F分别为47.429、64.532，P均<0.05)。COPD+CHD组患者血清miR-145、miR-146a水平分别与CRP、纤维蛋白原水平及Gensini评分呈负相关(r分别为-0.398/-0.384、-0.403/-0.395、-0.407/-0.413，P均<0.05)，而与肺功能指标FEV1/FVC、血气指标PaO2水平呈正相关(r分别为0.421/0.405、0.357/0.362，P均<0.05)。此外，高CRP水平、低PaO2水平、低FEV1/FVC水平、高Gensini评分、低miR-145水平、低miR-146a水平是影响COPD并发CHD的独立危险因素(P均<0.05)。血清miR-145、miR-146a联合诊断COPD合并CHD的曲线下面积(AUCROC)为0.887(95%CI:0.821～9.520)，明显高于miR-145、miR-146a单独诊断。结论?血清miR-145及miR-146a表达下调与COPD患者肺功能降低、病情加重有关，是患者并发CHD的独立危险因素。

摘要:摘要:目的?对1例先天性脊柱骨骺发育不良(SEDC)患儿进行基因检测和蛋白质功能预测，确定其致病原因，为家系遗传咨询及产前诊断提供依据。方法?应用高通量测序法对先证者454个骨病相关基因进行检测，对检出的可疑基因突变进行Sanger测序检测，对父母进行验证并对胎儿进行产前诊断。结果?该患儿检出COL2A1基因c.3589G>A(p.Gly1197Ser)杂合错义突变，其父母均未携带该突变，先证者为新发变异，家系中胎儿产前诊断结果提示胎儿未携带与先证者相同的变异。Polyphen2、Mutation Taster软件对其蛋白质功能预测的结果为有害。结论?COL2A1基因c.3589G>A变异是该SEDC家系先证者的致病原因。

摘要:摘要：目的?探讨microRNA-873(miR-873)在子宫内膜癌患者组织中的表达水平及其对人子宫内膜癌细胞增殖和侵袭的影响。方法?采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测子宫内膜癌患者癌组织和子宫肌瘤患者子宫组织中miR-873的表达水平，并分析miR-873表达水平与患者临床病理参数之间的关系。常规培养子宫内膜癌Ishikawa细胞，并设为空白对照组、阴性对照组和miR-873过表达组。采用qRT-PCR检测各组miR-873的表达水平；四甲基偶氮唑盐(MTT)试验检测细胞增殖能力；Transwell试验检测细胞侵袭能力。结果?与正常子宫内膜组织(1.07±0.04)比较，子宫内膜癌组织中miR-873的表达水平(0.52±0.12)明显降低(t=34.199，P<0.05)。miR-873的表达水平与肌层浸润深度、淋巴结转移和FIGO分期有关(t分别为11.557、9.626、7.923，P均<0.05)。与阴性对照组(0.51±0.01)和空白对照组(0.51±0.02)比较，miR-873过表达组miR-873的表达水平(1.38±0.02)显著升高(F=5 855.962，P<0.05)，且细胞增殖水平受到抑制(P均<0.05)，细胞穿膜数降低(F=36.553，P<0.05)。结论?miR-873在子宫内膜癌中呈低表达，并可抑制Ishikawa细胞增殖和细胞侵袭能力。

摘要:摘要：目的?探讨脓毒症患儿循环外泌体中长链非编码RNA HOXA11-AS(LncRNA HOXA11-AS)的表达水平及对脓毒症的筛查效能。方法?选取2018年10月至2019年10月就诊的脓毒症患儿80例作为脓毒症组，另选取同期性别和年龄相匹配的体检健康儿童60例作为对照组。采集2组外周静脉血标本并提取外泌体。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测2组外泌体中LncRNA HOXA11-AS的表达水平。ROC曲线分析LncRNA HOXA11-AS对脓毒症患儿的筛查效能。结果?脓毒症患儿外周循环外泌体中LncRNA HOXA11-AS的表达水平明显高于对照组(1.54±0.89 vs 0.53±0.17,?t=15.23,?P<0.001)。LncRNA HOXA11-AS的表达与SOFA评分呈正相关(r=0.589，P<0.001)。脓毒症患儿C反应蛋白(CRP)浓度与SOFA评分呈正相关(r=0.432，P<0.01)。LncRNA HOXA11-AS的表达与WBC及CRP浓度呈正相关(r分别为0.561、0.614，P均<0.001)。外周循环外泌体中LncRNA HOXA11-AS筛查脓毒症的ROC曲线下面积(AUCROC)为0.947，当cut-off值为1.23时，敏感性为90.9%，特异性为93.9%。结论?外周循环外泌体中LncRNA HOXA11-AS对儿童脓毒症的诊断具有较高的筛查价值。

摘要:摘要：目的?探讨血清肿瘤标志物ProGRP、NSE、CEA、CYFRA21-1、SCC单独及联合检测在肺癌鉴别诊断中的临床应用价值。方法?选取2016年12月至2018年5月于本院就诊且经病理组织学诊断为肺癌的237例患者作为肺癌组，其中小细胞肺癌(SCLC)106例，非小细胞肺癌(NSCLC)131例。选取同期就诊的肺良性疾病患者95例作为肺良性疾病组，其中慢性阻塞性肺炎45例，支气管扩张25例，肺炎12例，支气管炎8例，支气管哮喘3例，矽肺2例。采用电化学发光法检测各组患者血清ProGRP、NSE、CEA、CYFRA21-1、SCC的表达水平，并进行统计学分析；Logistic回归及ROC曲线评估该5种血清肿瘤标志物单独及联合检测在肺癌鉴别诊断中的临床应用价值。结果?肺癌患者血清ProGRP、NSE、CEA和CYFRA21-1的表达水平显著高于肺良性疾病组(P均<0.05)。Logistic回归分析及ROC曲线显示，5种血清肿瘤标志物联合检测鉴别诊断肺癌的ROC曲线下面积(AUCROC=0.779)均高于单项检测。在检测效能方面，ProGRP检测的特异性最高(98.9%)，SCC检测的敏感性最高(94.9%)，而联合检测的准确性最高。结论?ProGRP、NSE、CEA、CYFRA21-1和SCC的单独及联合检测在肺癌鉴别诊断中具有较好的临床应用价值。

摘要:摘要：液体活检技术在肿瘤临床应用研究中越来越广泛。含肿瘤突变的循环肿瘤DNA(ctDNA)可以在疾病进展过程中多次检测，是一种简单有效的非侵入性“液体活检”技术。作为一种附加的诊断工具，ctDNA可以提供肿瘤负荷及肿瘤中存在的突变等诸多信息，并能克服组织活检所面临的肿瘤内异质性问题，在肿瘤的诊断和治疗中具有潜在的应用价值。食管癌具有较高的死亡率，且早期诊断困难，多数患者确诊时已达中晚期，治疗手段的有限导致患者在接受根治性切除术后仍可因肿瘤复发而死亡。该文总结了运用ctDNA辅助诊断和治疗食管癌的研究进展，旨在获得一种理想的生物学标志物以优化食管癌患者治疗策略。

摘要:摘要：目的?探究胃癌间充质干细胞(gastric cancer mesenchymal stem cells, GCMSCs)葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)的表达及其在肿瘤细胞迁移中的作用。方法?采用western blot检测G6PD在GCMSCs、骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMMSCs)和胃癌细胞来源外泌体(exosome)预处理BMMSCs中的表达水平。生化分析仪检测MSCs 中G6PD的活性。活性氧(ROS)探针检测MSCs中ROS的表达水平。台盼蓝染色法检测细胞存活率。细胞迁移试验检测G6PD对MSCs和胃癌细胞迁移的影响。使用CCK-8试剂盒检测MSCs增殖能力。结果?GCMSCs 中G6PD的表达量及活性较BMMSCs明显升高(t分别为7.497、11.75，P<0.01)，且GCMSCs促进胃癌细胞迁移能力较BMMSCs明显增强(P<0.05)。胃癌细胞来源的exosome通过调节P53，上调BMMSCs 中G6PD的表达水平(P<0.01)。G6PD可清除MSCs细胞内活性氧，维持MSCs在低胎牛血清(t=11.29，P<0.01)或H2O2?(t=3.444，P<0.05)的条件下存活，并促进MSCs增殖和迁移(P<0.01)。胃癌患者肿瘤基质细胞G6PD的表达与胃癌组织大小及转移有关(P<0.05)。结论?GCMSCs通过高表达G6PD促进胃癌细胞迁移。肿瘤基质G6PD有望成为肿瘤诊断和预后监测的潜在标志物。

摘要:摘要：目的?应用西格玛(σ)度量值分析本科室常规开展的肿瘤标志物项目质量控制数据，评价其精密度分析性能，设计质量控制方法，指导质量持续改进。方法?收集2018至2019年西安医学院第一附属医院检测的AFP、CEA、CA125、CA199、CA153、tPSA、fPSA、铁蛋白(FERR)、β-HCG和β2微球蛋白(β2-MG) 共计10个参加国家卫健委临床检验中心室间质评的肿瘤标志物室内质控及室间质评数据，按照国家卫健委临床检验中心室间质评允许总误差(TEa)标准，采用6σ计算公式计算检验项目σ值，评价检测项目分析性能，设计质量控制方法，计算检测项目的质量目标指数(QGI)，运用鱼骨图分析导致性能不佳的主要原因，提出优先改进方案。结果?2018年数据结果显示，在10个肿瘤标志物项目中，平均σ值为4.25，其中σ≥6项目2个，5≤σ<6项目5个，4≤σ<5项目4个，3≤σ<4项目7个，2≤σ<3项目2个；根据QGI值，需要优先改进精密度的项目有7个，分别为：AFP、CA125、CA199、CA153、FERR、β-HCG和β2-MG；需要优先改进正确度的项目有3个，分别为CEA、t-PSA 和f-PSA。通过持续改进，2019年σ值平均值为6.58，其中σ≥6项目16个，5≤σ<6项目3个，4≤σ<5项目1个。与2018年σ值相比，世界一流水平项目比例明显增多，差异具有统计学意义(P<0.05)。结论?6σ质量管理是实验室开展质量控制的一项有效的管理工具，可以评价检测项目的性能，指导质量持续改进。

摘要:摘要：目的?根据临床和实验室标准研究院(CLSI)2016年版的C24-Ed4文件指南《定量检测程序的统计质量控制》，基于检测项目所需的质量、检测性能指标以及统计质量控制(SQC)程序(质控规则、质控检测数、SQC事件频率或运行量)的患者危害风险，为实验室22项常规生化项目进行SQC策略设计。方法?确定检测项目所需的质量要求即允许总误差(TEa)，确定方法的精密度(CVA%)和偏移(Bias%)并计算出西格玛度量(σ)值，运用西格玛运行大小诺曼图(Sigma-Metric Run Size Nomogram)，制定SQC计划，明确在某个质控品水平处应分析的最大预期样品量，并且在实验室检测过程中运行已经制定好的过程SQC程序。结果?镁(Mg)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、淀粉酶(Amy)、尿酸(UA)、总胆红素(T-Bil)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、三酰甘油(TG)、磷(P)、γ-谷氨酰基转移酶(GGT)和肌酸激酶(CK)这12个项目的σ>5，在SQC设计里有长的分析批长度、简单的质控规则和最少的质控运行量；胆固醇(TC)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、钾(K)、氯(Cl)、尿素(Urea)、钠(Na)和乳酸脱氢酶(LDH)这7个项目的5>σ>3,SQC里使用了较短的分析批和较严格的质控规则；总蛋白(TP)、葡萄糖(Glu)和钙(Ca)这3个项目的σ<3，使用了最短分析批和多规则质控。1周的过程质控中失控次数分别为：ALP、GGT、CK、Urea、Cl和Glu失控1次；Ca失控2次、TP失控3次。Ca和TP表现性能差。结论?σ值的高低决定了检测过程监控SQC策略中分析批的长短、质控规则和质控数量。改善低σ值项目的方法性能，实际运用中为每一个项目制定最佳SQC策略，可以最大程度地降低患者风险。

摘要:摘要：目的?用IH-1000全自动血型仪(简称IH-1000)筛选稀有血型献血者，为稀有血型患者筛选配血相合的血液以保证其临床用血。方法?借助经典试管抗人球蛋白实验、96孔板抗人球蛋白实验、手工微柱凝胶卡法、IH-1000血型仪4种方法进行Fya抗原阴性血液筛选预实验，对照比较后确认IH-1000方法筛选稀有血型献血者的可行性，并行实际操作初步筛选出Fya抗原阴性血液，再用手工微柱凝胶卡法进行确认，为产生Fya抗体的Fya抗原阴性稀有血型患者主侧配血。结果?从1 500名献血者中筛选出4名Fya阴性献血者，其中2名献血者与1例血清不规则抗体筛查阳性(鉴定为抗Fya抗体、抗E抗体、抗c抗体)的患者主侧配血相合。IH-1000筛选Fya阴性血液与传统手工筛选方法对比，在试剂用量、操作便利性、实验通量、结果判读等方面具有明显优势。结论?相比于传统实验方法，采用IH-1000全自动血型仪筛选稀有血型献血者简单、迅速、高效，省时省力，能够及时为稀有血型患者解决用血难的问题。