摘要:摘要:近年来，液体活检技术在新型肿瘤标志物研发领域异军突起，新型检测技术、新产品、新应用不断涌现。肿瘤液体活检是通过各种技术检测肿瘤释放到体液，尤其是外周血中的肿瘤细胞、肿瘤游离DNA以及外泌体等物质，实现肿瘤精准诊疗。因具备微创性、能够克服肿瘤异质性、便于实时动态监测等优势，液体活检在肿瘤早期诊断及精准治疗等方面临床应用前景广阔。然而，基础研究、检测技术、质控规范及临床应用方面的诸多问题也对肿瘤液体活检提出了挑战。

摘要:摘要：液体活检之所以能够实现，得益于多种检测技术的进步，能够检测体液中各种微量物质的变化。数字PCR技术因其对核酸的检测具有灵敏度和精密度高的特点，特别适合于液体活检中对微量核酸的定量检出。然而,数字PCR技术存在多种实现手段，因其原理不同，检测设备设计的不同，配套的试剂耗材不同，导致不同数字PCR检测体系存在各自的技术优势和不足。此外，数字PCR技术今后的发展方向主要包括技术平台的发展方向和临床运用的发展方向，也是目前学界关注的内容。该文就多种数字PCR平台的技术优势、当今已有的设备和配套产品以及数字PCR技术今后的发展方向作一阐述。

摘要:摘要：目的：检测环状RNA hsa_circ_0128298在肝细胞肝癌（hepatocellular carcinama，HCC）中的表达，评价其参与HCC生长过程中的功能。 方法：qPCR法检测50例HCC癌组织与相应的癌旁组织以及HCC细胞中hsa_circ_0128298的表达水平；采用CCK-8试验、流式细胞术、western blot等方法分析hsa_circ_0128298对HCC细胞增殖的影响；ROC曲线及生存曲线分析其在HCC诊断及预后中的价值。 结果：与癌旁组织比较，hsa_circ_0128298在HCC癌组织中的表达显著升高（ U =846.0， P = 0.005 ）；hsa_circ_0128298筛查HCC的ROC曲线下面积（AUC^ROC）为0.661，95%置信区间( CI )为0.560～0.753，敏感性为 80.0% ，特异性为50.0%。hsa_circ_0128298高表达的HCC患者总生存时间明显低于hsa_circ_0128298低表达者（ χ 2=6.294， P = 0.012）。RNA干扰hsa_circ_0128298（si-hsa_circ_0128298）可显著抑制HCC细胞增殖，诱导细胞周期G0/G1期阻滞，同时可诱导细胞周期蛋白 p21 mRNA及 蛋白质表达上调；而si-p21可逆转si-hsa_circ_0128298引起的HCC细胞增殖抑制及细胞周期阻滞，恢复其生长增殖潜能。 结论：hsa_circ_0128298在HCC中高表达，可通过调节p21的表达促进HCC的生长，有望成为HCC诊断与治疗的新靶点。

摘要:摘要：目的：基于光激化学发光技术平台初步建立血清催乳素（PRL）的分析方法，并评估其性能指标。 方法：将发光纳米微球和生物素分别标记于一对人PRL单抗，两者与血清中待检PRL、链霉亲合素标记的感光微球（通用感光溶液）在均相条件下形成双抗体夹心的检测体系，对该检测体系的性能指标和相关性进行评价。 结果：本方法的批内变异系数和日间变异系数分别为4.60%和5.25%；功能灵敏度为2.48 μIU/mL，可报告范围为2.48～4 240 μIU/mL；回收试验加入浓度为42.2、424、4 240 μIU/mL PRL标准品时的回收率为96.25%～102.93%；胆红素＜20 mg/dL、血红蛋白＜200 mg/dL、三酰甘油＜3 000 mg/dL、生物素＜20 ng/mL时，均无干扰现象发生；该方法与贝克曼Unicel Dxi 800 Access 2增强化学发光酶免疫分析法具有良好的相关性。 结论：光激化学发光法检测血清PRL的方法具有良好的分析性能，可满足临床诊断需求。

摘要:摘要：目的：采用液滴式数字PCR（ddPCR）法检测晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者外周血循环肿瘤DNA（ctDNA） EGFR 基因突变的情况，探讨试剂盒的性能、检测结果的可靠性和准确性以及ddPCR法在外周血ctDNA中的应用价值。 方法：使用标准突变比例的模拟cfDNA样本ddPCR法对试剂检测限、准确性、特异性、精密度、抗干扰能力等指标进行分析及评价；使用ddPCR法检测262例NSCLC患者外周血ctDNA，随机选取30例样本同时进行Super-ARMS法检测，并从方法学标准化和检测结果准确性两方面进行统计学分析。 结果：检测试剂在检测限以上的准确性、特异性均为100%，定量精密度（突变比例对数的绝对值变异系数 CV ）＜5%，关键环节质量控制各主要参数的相关性和线性关系均符合要求；Super-ARMS和ddPCR法同步检测30例NSCLC患者外周血ctDNA的结果具有较好的一致性（ Kappa =0.783， P =0.000）。 结论：ddPCR法灵敏度高，可绝对定量，是血液检测的有效的方法，但其在检测过程中存在较多对检测结果产生影响的环节，故而检测方法标准化至关重要。

摘要:摘要:目的：对 2016—2018年江苏省血液表皮生长因子受体（ EGFR ）基因突变检测室间质量评价的总体情况及存在问题进行分析和探讨，为临床实验室检测流程的规范和检测质量的保证提供依据。 方法：室间质评每年1次，2016年样本盘为4支cfDNA（cell-free DNA）样本，2017和2018年样本盘均为5支含cfDNA的血浆样本，要求各参评实验室收到样本后在规定的时间内检测并将所需填报的信息及测定结果上传至江苏省临床检验中心数据库；依据回报结果计算各实验室的成绩，分析每批样本的总体符合率、假阴性率、假阳性率及问题与风险。 结果：3次室间质评分别收到10份、16份和20份有效回报结果。检测结果完全符合的实验室分别为30.0%（3/10）、37.5%（6/16）和10.0%（2/20）；以得分≥80分为合格，合格率分别为90.0%（9/10）、56.2%（9/16）和50.0%（10/20）；假阴性率分别为70.0%（7/10）、56.2%（9/16）和88.9%（16/18），而假阳性率分别为0%（0/10）、25.0%（4/16）和22.2%（4/18）。测定方法敏感性和cfDNA提取效率不高是假阴性的主要原因，污染和阈值设置缺乏验证是假阳性的主要原因。 结论：针对血液标本的肿瘤相关基因突变检测需选择高敏感性测定方法、优化核酸提取效率、规范检验流程和强化结果的分析和验证。

摘要:摘要：液体活检是一种利用人体体液获取疾病信息的技术，可实现对肿瘤的动态监测，具有巨大的临床应用前景。肿瘤液体活检主要包括对外周血中肿瘤相关的循环核酸、细胞外囊泡和循环肿瘤细胞的检测。该文主要对循环肿瘤DNA、细胞外囊泡及循环肿瘤细胞的检测技术作简要综述。

摘要:摘要：肺癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，血清肿瘤标志物、影像学以及病理学检查是目前肺癌的主要检查手段，但这些检查方式在肺癌的临床应用中都具有自身的局限性。循环肿瘤细胞（circulating tumor cells,CTCs）属于“液体活检”中的一种，在肺癌的临床分期、疗效评价、早期诊断、复发及转移的监测方面都有着重要的作用。此外，对于不能获得肿瘤组织的晚期肺癌患者，CTCs因其来源于肿瘤原发灶而可作为一种替代途径指导个体化治疗。该文就CTCs在肺癌中的研究进展作一综述。

摘要:摘要：目的：探究长链非编码RNA（long non-coding RNA, lncRNA）LINC00978 在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）中的表达变化及生物学功能，并初步探讨其作用机制。 方法：采用qRT-PCR检测NSCLC患者肿瘤组织与血清中LINC00978的表达水平。通过CCK-8、平板克隆、Transwell迁移和侵袭实验观察LINC00978敲减和过表达对A549细胞生物学功能的影响。采用流式细胞术、qRT-PCR和western blot探究LINC00978的作用机制。 结果：LINC00978在NSCLC患者肿瘤组织（ t =2.465， P ＜0.05）和血清（ t =8.781， P ＜0.01）中呈高表达。LINC00978敲减抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭能力（ P 均＜0.01 ），诱导G1期阻滞以及细胞凋亡（ P 均＜0.01）。LINC00978敲减下调Cyclin D1和Bcl-2的表达而上调Bax的表达（ P 均＜ 0.05 ）。此外，LINC00978敲减抑制N-cadherin、Vimentin、Snail、Slug和Twist的表达而促进E-cadherin的表达（ P 均＜0.05）。LINC00978过表达则具有相反作用。 结论：LINC00978在NSCLC中高表达，并促进NSCLC发生、发展，具有成为NSCLC诊断及治疗新靶点的潜能。

摘要:摘要：目的：探讨广西地区人群中LncRNA GAS5 基因启动子区1个功能性插入/缺失位点（rs145204276I/D）多态性的分布特点，并分析广西地区人群与其他地区人群rs145204276I/D位点多态性的分布差异。 方法：采用SNPscan技术对289例广西地区人群 GAS5 基因rs145204276I/D位点进行基因分型检测，统计其基因型和等位基因在广西地区人群不同性别间的分布，并分析其多态性与国际千人基因组计划（1000 genome project）数据库公布的欧洲人群（European，EUR）、日本人群（Japanese in Tokyo；JPT,）、西亚人群（South Asian，SAS）、美国人群（Ad Mixed American，AMR）、非洲人群（African，AFR）、北京人群（Han Chinese in Beijing，CHB）以及文献报道的南京、吉林、重庆和昆明人群的分布差异。 结果：广西地区人群 GAS5 基因rs145204276I/D位点I/I、I/D和D/D基因型频率分别为48.4%、43.6%和8.0%，I和D等位基因频率分别为70.2%和 29.8% 。rs145204276I/D基因型和等位基因频率在广西地区人群不同性别间比较差异无统计学意义（ P ＞0.05）。广西地区人群 GAS5 基因rs145204276I/D位点的基因型和等位基因频率与EUR、AFR、AMR和JPT人群比较差异均有统计学意义（ P 均 ＜0.05 ），而与CHB、南京、吉林、重庆和昆明人群比较差异均无统计学意义（ P ＞ 0.05 ）。 结论：广西地区人群LncRNA GAS5 基因rs145204276I/D位点基因多态性在男性和女性人群中分布无差异，而其多态性与其他地区人群间比较存在不同程度的差异。

摘要:摘要：目的：分析卵巢癌患者血浆和组织中LincROR的表达，探讨LincROR在卵巢癌筛查中的价值。 方法：收集30例健康女性、56例卵巢囊肿、23例子宫内膜异位症、38例子宫内膜癌、35例宫颈癌、42例卵巢癌、21例卵巢癌术后及26例卵巢癌化疗后患者的血浆样本，荧光定量PCR分析LincROR在各组样本中的表达水平，结合临床数据评估LincROR在临床妇科常见疾病中的筛查效能。 结果：LincROR在卵巢癌患者血浆中的表达水平（2.90±4.42）明显高于健康人（0.23±0.28）和卵巢良性囊肿患者（0.62±0.55） ，差异有统计学意义（ P 均＜0.01）。ROC曲线分析结果表明，血浆LincROR在卵巢癌筛查中的价值优于CA125、CA199、CA153、AFP和CEA等指标， LincROR和CA125联合筛查卵巢癌的敏感性为89.7%，特异性为86.7%（AUC^ROC：0.918, 95% CI ：0.817～0.973）。此外，卵巢癌术后患者血浆中LincROR的表达水平明显低于未经任何治疗的卵巢癌患者（ 0.50± 1.72 vs 2.90±4.42， P ＜0.01）。ROC曲线分析表明，血浆LincROR是比CA125更敏感的卵巢癌化疗疗效的评价指标（AUC^ROC ：0.866 vs 0.738）。 结论：LincROR有望成为卵巢癌筛查的生物学标志物，联合CA125可提高筛查的敏感性和特异性，同时在评估卵巢癌化疗疗效中具有潜在的临床价值。

摘要:摘要：目的：分析1例自身免疫性多内分泌腺病综合征I型家系的自身免疫调节因子（autoimmune regulator, AIRE ）基因突变。 方法：采集家系成员外周血标本，PCR扩增和Sanger测序筛查 AIRE 上的突变位点，采用构建酶切位点PCR（created restriction site PCR,CRS-PCR）和PCR-限制性片段长度多态性法（PCR restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP）在100例健康人群中筛查验证，应用SIFT、PolyPhen-2、Mutation Taster、Antheprot Editor软件分析突变对蛋白质结构和功能的影响，使用 Alternative Splice Site Predictor、FruitFly Splice Predictor、SplicePort软件预测突变对mRNA剪切位点的影响，并以Sanger测序验证。 结果：在先证者 AIRE 基因上筛选出新的复合性杂合突变c.47 C＞G T16R和c.1631-2 A＞T。c.47位点在不同物种中高度保守和同源性，c.47C＞G的错义突变改变蛋白质的二级结构和疏水性，影响蛋白质的功能。c.1631-2 A＞T突变会引起剪切位点消失，造成靶mRNA上13号外显子缺失。 结论：在自身免疫性多分泌腺病综合征Ⅰ型的家系中发现2个新的致病突变位点，分别为c.47C＞G T16R 和c.1631-2 A＞T。

摘要:摘要：目的：探究miR-34a及 FUT8 的异常表达对乳腺癌多药耐药性的调控机制，明确乳腺癌耐药的诊疗靶点。 方法：采用Real-time PCR及western blot技术检测MCF-7和MCF-7/ADR中miR-34a和 FUT8 的表达水平； Real-time PCR技术检测乳腺癌细胞系中miR-34a的转染效率；通过生物信息学方法预测并采用双荧光素酶报告实验验证 FUT8 与miR-34a之间的靶向关系；特异性调控miR-34a的表达后，分别通过Real-time PCR、western blot以及免疫荧光染色检测转染细胞系中 FUT8 基因及蛋白质水平变化；采用CCK8实验、免疫荧光实验检测其对MCF-7和MCF-7/ADR细胞增殖、耐药性的调控作用。 结果： miR-34a 在MCF-7中的表达水平明显高于MCF-7/ADR（ P =0.002 6）； FUT8 基因在MCF-7/ADR中的表达水平明显高于MCF-7（ P = 0.001 6）； FUT8 是miR-34a调控乳腺癌耐药性的靶点（ P =0.001 9）；特异性上调MCF-7/ADR细胞中miR-34a的水平可明显抑制 FUT8 的表达，并抑制该细胞的多药耐药性及增殖性；而下调MCF-7细胞中miR-34a表达后， FUT8 的表达水平明显升高,同时增强了细胞多药耐药及增殖能力。 结论：miR-34a通过调控下游基因 FUT8 的表达介导乳腺癌多药耐药。

摘要:摘要：目的：分析内蒙古包头地区非小细胞肺癌(NSCLC）患者 EGFR 基因突变的情况。 方法：采用等位基因特异PCR(allele specific PCR，ASPCR)荧光探针法检测内蒙古包头地区506例NSCLC患者 EGFR 基因的突变情况，并分析该突变与患者临床相关参数的关系。 结果：506例NSCLC患者中检出 EGFR 基因突变197例，总体突变率为38.93％，突变发生以单一位点为主，在总体突变中占92.39％(182/197），共检出 EGFR 基因第18～21号4个外显子上7个位点的突变，其中突变率发生最高的2个为21-L858R和19-del位点，分别占总体突变的38.07%(75/197）和30.96％(61/197）；检出两位点发生突变者14例，占总体突变的7.11％(14/197），其中19-del+20-T790M位点突变6例、21-L858R+20-T790M位点突变5例；发现1例三位点突变者，为20-Ins+20-T790M+21-L861Q；男性患者的突变率明显低于女性(32.87% vs 47.00%, χ 2=10.412， P ＜0.05）；病理类型为腺癌患者的突变率明显高于鳞癌患者(42.20% vs 18.57%, χ 2=14.166， P ＜0.05）。 结论：内蒙古包头地区NSCLC患者 EGFR 基因突变以单一位点为主，且存在2个以上多位点同时突变的个体；可作为指导NSCLC患者使用抗 EGFR 靶向药物治疗的重要指标。

摘要:摘要：目的：探讨Hank′s平衡盐溶液（Hank′s balanced salt solution，HBSS）诱导的饥饿环境对肺癌细胞凋亡相关分子高迁移率组蛋白B1（HMGB1）表达的调控作用，并分析肺癌患者血清HMGB1水平在肺癌筛查中的应用价值。 方法：设置HBSS处理组（使用HBSS更换完全培养基后继续培养）与对照组（使用完全培养基进行培养）。利用HBSS处理Lewis肺癌细胞12 h后，采用分光光度法检测肺癌细胞中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）活性。利用HBSS处理Lewis肺癌细胞 0.5 h 后，采用流式细胞术检测饥饿条件下肺癌细胞中氧化应激效应分子——活性氧（ROS)的表达水平。利用HBSS处理Lewis肺癌细胞0、4、8和12 h后，使用western blot检测细胞内HMGB1蛋白的表达水平。采用ELISA法检测肺癌患者（ n =50）血清中HMGB1的表达水平，并分析其与血清肿瘤标志物水平间的相关性。 结果：与对照组（0.14±0.01 U/L）相比，HBSS刺激 12 h 后，Lewis肺癌细胞中Caspase-3活性（0.24±0.01 U/L）明显升高（ P ＜0.01）。流式细胞术检测结果表明，与对照组（MFI:63.00±4.58）相比，HBSS刺激0.5 h后，Lewis肺癌细胞中ROS水平（MFI:293.00±9.54）上调（ P ＜0.01）。western blot结果显示，HBSS刺激0、4、8和12 h后，Lewis肺癌细胞中HMGB1蛋白的表达水平明显升高（ P 均＜0.01）。ELISA法结果显示，与健康人对照（3.36±0.20 ng/mL）相比，肺癌患者血清中HMGB1的水平（12.76±0.74 ng/mL）明显升高（ P ＜0.05），且与血清CEA水平呈正相关（ r =0.44， P ＜0.01）。 结论：肿瘤饥饿环境能够促进肺癌细胞中凋亡相关分子HMGB1的表达，肺癌患者血清HMGB1水平与肺癌发展密切相关。

摘要:摘要：目的：检测miR-497在乳腺癌组织中的表达水平，探讨其在乳腺癌细胞中的作用机制。 方法：qRT-PCR法检测36例乳腺癌患者癌组织及癌旁组织中miR-497的表达水平；采用脂质体法将miR-497 mimics、mimics NC、miR-497 inhibitor和inhibitor NC分别转入MDA-MB-231乳腺癌细胞系，通过MTT实验和细胞迁移实验分析miR-497对MDA-MB-231细胞增殖和迁移能力的影响；采用靶基因预测软件Targetscan human release7.1预测miR-497的靶基因，western blot验证miR-497 mimics、mimics NC、miR-497 inhibitor 和inhibitor NC对靶基因蛋白的影响。 结果：qRT-PCR结果显示，与癌旁组织（7.76±1.58）比较，miR-497在乳腺癌组织中的表达水平（2.12±1.04）明显降低（ t =17.85, P ＜0.01）；MTT实验结果显示，与mimics NC组［（104.36± 3.25 ）%］比较，转染miR-497 mimics组［（67.56±4.11）%］的细胞增殖能力明显减弱（ t =13.1, P ＜0.01）；细胞迁移实验证实, 与mimics NC组比较，转染miR-497 mimics后的细胞迁移能力减弱（272.3±8.5 vs 173.6±7.1, P ＜0.05）；与inhibitor NC组比较，转染miR-497 inhibitor后细胞迁移能力增强（269.5±7.3 vs 346.1±13.5， P ＜0.01）；靶基因预测软件预测 HSP40 可能是miR-497的靶基因；western blot结果显示，与mimics NC组比较，miR-497 mimics转染后的HSP40蛋白表达水平下调( P ＜0.01)；而与 inhibitor NC 组比较，转染miR-497 inhibitor后其HSP蛋白的表达水平升高（ P ＜0.01）。 结论：miR-497可能通过靶向 HSP40 抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移，从而对乳腺癌进程起到调节作用。

摘要:摘要：目的：通过分析GEO数据库中的基因芯片数据，筛选宫颈癌相关的差异表达基因。 方法：从GEO数据库中下载宫颈癌相关基因表达数据集GSE9750和GSE63514，利用GEO2R工具筛选差异表达基因；利用DAVID在线工具进行GO和KEGG富集途径分析；利用GSE7803、GSE39001和TCGA中的数据对结果进行验证。 结果：共筛选出176个宫颈癌相关差异表达基因，包括上调基因41个，下调基因135个； INHBA 基因在宫颈癌组织中高表达，且与患者的总生存期（ HR =2.5, P ＜0.01）和无病生存期呈负相关（ HR =2.7, P ＜0.01）。 结论：通过分析GEO中的基因芯片数据获得多个宫颈癌发病相关的基因， INHBA 基因可作为患者的诊断及预后评估的潜在新分子标记。

摘要:摘要：目的：对1例2-三体嵌合伴肾积水胎儿进行细胞与分子遗传学检测,分析其基因型与表型的关系。 方法：对1例唐氏筛查高风险和产前超声提示胎儿异常的孕妇抽取羊水细胞进行G显带染色体核型分析，并采用微阵列比较基因组杂交技术（array-based comparative genomic hybridization, aCGH）检测胎儿未培养的细胞。 结果：胎儿羊水细胞首次培养核型分析结果为47,X#,+2［8］/46,X#［28］；羊水细胞二次培养核型分析为46,X#［60］；aCGH检测结果提示为2-三体嵌合体。 结论：aCGH检测未培养细胞能减少细胞培养的假阴性，G显带结合aCGH技术应用于产前诊断，有利于遗传咨询及胎儿预后评估。