摘要:摘要：目的：建立一种基于高分辨率熔解曲线（HRM）技术的药物性耳聋相关线粒体12S rRNA基因1494C>T和1555A>G突变快速检测方法。 方法：采用定点诱变克隆策略构建突变质粒DNA标准品；建立突变位点靶序列PCR扩增及HRM分析方法，并检测106例非综合征耳聋患者标本，以DNA直接测序法进行验证。 结果：建立的HRM检测方法能准确检出线粒体12S rRNA基因1494C>T和1555A>G突变，各基因型HRM曲线特征明显且易于分析判断；106例非综合征耳聋患者标本中检出6例1555A>G突变，检测结果与DNA测序结果一致。 结论：建立了药物性耳聋相关人类线粒体12S rRNA基因1494C>T和1555A>G突变HRM检测方法，操作简单快速、结果准确可靠，可应用于人群筛查和临床常规分子诊断。

摘要:摘要：目的：对超速离心法、超滤法和沉淀法3种分离尿液中外体（exosome）方法进行比较，为临床研究选择合适的分离方法提供依据。 方法：用超速离心法、超滤法和沉淀法3种方法分别从4例健康人和2例慢性肾脏病（CKD）患者尿液中分离exosome。用透射电镜观察尿exosome形态结构，BCA法检测exosome总蛋白质浓度，分别在尿体积及exosome总蛋白质浓度相同上样条件下，用western blot（WB）检测exosome标志蛋白TSG101和Alix。 结果：3种分离方法均能获得直径为40~100 nm的圆形膜性囊泡；WB能检测到超速离心法及超滤法分离得到的exosome标志蛋白，而沉淀法未检测到；超滤法尿exosome总蛋白质浓度远高于超速离心法及沉淀法；超速离心法尿体积及exosome总蛋白质浓度相同情况下上样时所有样本均能检测到exosome标志蛋白，且表达量在3种方法中均最多；超滤法尿体积相同情况下上样，4例健康人均能检测到exosome标志蛋白，而以exosome总蛋白质浓度相同上样时，仅有2例健康人能检测到标志蛋白，但2例CKD患者在此两种上样方式未检测到标志蛋白；沉淀法两种上样条件下所有样本均未检测到exosome标志蛋白。 结论：超速离心法分离尿exosome效果较好，开展尿exosome临床研究时建议选择超速离心法。

摘要:摘要：目的：评价4种基于血清肌酐（Cr）或基于血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（CysC）的估算肾小球滤过率公式在体检人群中的适用性。 方法：随机取出2 032例体检健康者，分别检测血清Cr、CysC、尿清蛋白和肌酐比值（ACR），通过4种公式，即同位素稀释质谱法 肾脏病膳食改善公式（IDMS-MDRD）、慢性肾脏病流行病合作组（CKD-EPI）公式（EPI-Cr、EPI-CysC和EPI-Cr-CysC），分别计算其估算的肾小球滤过率（eGFR）并进行比较。 结果：2 032例体检健康者血清Cr为（65.4±14.3）μmol/L，血清CysC为（0.77±0.19）mg/L，ACR中位数为3.1 mg/g。将4种公式计算的eGFR值按照<60 mL/min/1.73 m²、60~89 mL/min/1.73 m²、≥90 mL/min/1.73 m²分为3组，3组分布差异均有统计学意义（P<0.05）。联合4种公式计算的eGFR和ACR对CKD预后分为低危、中危、高危和极高危4期，各期分布差异无统计学意义（P均>0.05）。在2 032例健康人群中，以EPI-Cr公式计算的eGFR值在45~60 mL/min/1.73 m²之间的例数为44例（2.2%），以IDMS-MDRD公式计算的eGFR值在45~60 mL/min/1.73 m²之间的例数为58例（2.9%），该58例人群的ACR结果有45例<30 mg/g，以EPI-Cr-Cys公式计算该45例人群的eGFR值，有40例> 60 mL/min/1.73 m²。 结论：联合eGFR和ACR对CKD预后进行分期，4种公式的一致性高。对于选用基于血清Cr的IDMS-MDRD公式计算的eGFR值，如果在45~60 mL/min/1.73 m²之间，建议检测CysC，并且采用血清Cr和CysC联合公式计算eGFR，以减少对患者GFR的误判。

摘要:摘要：目的：探讨不表达或低比例表达HLA-DR（HLA-DR^neg/low）急性单核细胞白血病（AML-M5）患者的免疫学表型特征。 方法: 用多参数流式细胞术对111例急性单核细胞白血病（AML-M5）患者的骨髓细胞进行检测，分析其免疫表型。 结果: 流式细胞术结果表明，HLA-DR抗原阴性表达者（HLA-DR^neg）9例，低表达者(HLA-DR^low)2例，且均表达CD13和CD33，不表达CD4，而 CD34、CD38、CD117、CD15、CD64、CD14和CD56均呈异质性表达；与HLA-DR^posi阳性者相比，HLA-DR^neg/low者CD4的阳性率差异有统计学意义（P=0.015），其他抗原阳性率的差异均无统计学意义。 结论: HLA-DR^neg/low的AML-M5患者CD抗原表达异常，多呈HLA-DR^neg/low/CD4^neg的表型特征，极易被误诊为其他类型的白血病。

摘要:摘要：目的：探讨高亲和力IgE受体（FcεRI）基因启动子区多态性（MS4A2 rs1441586和FcεRIG rs11587213）与青霉素过敏的相关性。 方法：以甘肃地区汉族人群200例青霉素过敏患者和210例对照为研究对象，采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术检测MS4A2 rs1441586和FcεRIG rs11587213两位点基因型及等位基因的分布频率，并通过测序进行验证。结果：过敏组MS4A2 rs1441586位点基因型频率与对照组相比差异无统计学意义（χ²=5.497，P>0.05），过敏组C等位基因频率为35.8%，高于对照组的29.3%（χ²=3.906，P<0.05）；按性别分组后其基因型及等位基因频率分布差异无统计学意义；按年龄分组后，非老年人群中过敏组基因型分布频率与对照组相比差异有统计学意义（χ²=5.908，P<0.05）。过敏组FcεRIG rs11587213位点基因型频率与对照组相比差异无统计学意义（χ²=5.526，P>0.05），过敏组G等位基因频率为7%，高于对照组的3.6%（χ²=4.847，P<0.05）；按性别分组后，男性过敏组与对照组基因型及等位基因频率分布差异仍有统计学意义（χ²分别为8.649、4.294，P均<0.05）；按年龄分组后，老年人群中两组间差异有统计学意义（χ²分别为7.637、5.550，P均<0.05）。 结论: FcεRI基因启动子区多态性可能与甘肃地区汉族人群青霉素过敏反应相关，MS4A2 rs1441586与非老年人青霉素过敏高度关联，FcεRIG rs11587213与男性以及老年青霉素过敏患者高度关联。

摘要:摘要：目的：建立由血清学指标组成的慢性丙型肝炎（丙肝）肝纤维化无创性综合诊断模型。 方法：收集慢性丙肝肝纤维化患者91例，随机分成模型组（68例）和验证组（23例），对年龄、性别以及27项血清学参数行单因素方差分析和多因素Logistic回归分析，筛选出独立预测因子并构建指数模型(FMIC模型)，采用受试者工作特征曲线（ROC曲线）评估模型的诊断能力。同时将FIMC模型与其他模型进行比较。 结果：建立了一个由血小板（PLT）、总胆红素（T-Bil）和透明质酸（HA）3项指标构成的判别丙肝肝纤维化程度的诊断模型FMIC。肝纤维化S2、S3、S4分期的cut off值分别为3.1、4.7、8.9，其ROC曲线下面积（AUC^ROC）分别为0.900、0.943、0.860；FMIC模型联合指标的AUC^ROC明显高于单独使用PLT、T-Bil、HA指标（AUCFMIC=0.905,AUCPLT=0.611, AUCT Bil=0.805,AUCHA=0.789）；FIMC模型的诊断效率高于其他模型(AUC^FMIC=0.943,AUC^{Forns index}=0.629, AUC^APRI=0.446,AUC^CDS=0.682,AUC^API=0.582,AUC^AAR=0.405)。 结论：建立的丙肝肝纤维化程度的诊断模型FMIC，提高了诊断效率，避免了不必要的肝脏活检。

摘要:摘要：目的：明确深圳地区婴幼儿粪便中分离出的艰难梭菌的毒力及其基因型。 方法：收集深圳市宝安区妇幼保健院2014-2015年分离出的49株艰难梭菌菌株，PCR检测其毒素A、B的编码基因tcdA、tcdB的携带状况，数字化PCR-核糖体分型方法进行基因分型。 结果：49株艰难梭菌tcdA、tcdB携带率分别为44.9%（22/49）和59.2%（29/49），其中22株tcdA、tcdB均为阳性，7株为tcdA阴性、tcdB阳性；49株菌可分为22种核糖体型，最常见的核糖体型为RT017（7/49，14.3%），BA03（5/49，10.2%），BA16（5/49，10.2%）和BA13（4/49，8.2%）。7株RT017菌株均为tcdA^-tcdB⁺，而最常见的tcdA^{+tB+菌株（44.9%，22/49）则来自RT017以外的15种核糖体型。 结论：深圳地区婴幼儿中分离出的艰难梭菌半数以上为产毒株，且产毒株多同时携带tcdA、tcdB基因；基因型则以RT017为主，且均为产毒素B而不产毒素A菌株。}

摘要:摘要：目的：探讨错配修复基因（hMLH1）、RAS相关区域家族1A基因（RASSF1A）启动子区甲基化以及ALU基因甲基化水平与肾细胞癌（肾癌）的关系。 方法：巢式甲基化特异性PCR(nMSP)检测15例肾癌组织及其相应癌旁组织中hMLH1、RASSF1A基因启动子区的甲基化状态，联合亚硫酸氢钠限制酶分析方法（COBRA)分析ALU基因甲基化水平。结果：hMLH1基因在肾癌组织中的甲基化率（0.41±0.18）%高于癌旁组织（0.32±0.13）%，差异有统计学意义（t=2.52，P<0.05）；ALU基因在癌组织中的甲基化率（0.11±0.04）%低于癌旁组织（0.12±0.03）%，差异有统计学意义（t=3.82,P<0.05）。而RASSF1A基因在肾癌组织和癌旁组织中的甲基化率分别为（0.75±0.11）%和（0.69±0.12）%，差异无统计学意义（t=1.35，P>0.05）。结论：hMLH1基因启动子区甲基化以及ALU基因甲基化可能与肾癌的发病有关，RASSF1A基因启动子区甲基化与肾癌发病无关。

摘要:摘要：目的：探讨冠心病患者尿miR-126的表达及其与阿司匹林抵抗的关系。 方法：收集118例冠心病患者作为冠心病组，118例体检健康者作为健康对照组，采用实时荧光定量PCR法检测尿miR-126表达量，并用全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-ch)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-ch)、载脂蛋白 A1(ApoA1)、载脂蛋白B(ApoB)、三酰甘油（TG)、C-反应蛋白（CRP）、葡萄糖（Glu）水平，通过光透视比浊法检测血小板聚集率，以区分阿司匹林抵抗（AR）和非阿司匹林抵抗（NAR）。 结果：冠心病组HDL-ch水平明显低于健康对照组（P＜0.05）；ApoB、TG和Glu水平则高于健康对照组（P＜0.05）。冠心病组的尿miR-126水平低于健康对照组(0.19±0.03 vs 0.28±0.03,t=2.30, P=0.02)；但在AR和NAR患者中的表达水平差异无统计学意义(0.19±0.08 vs 0.21±0.09,t=1.80, P＞0.05）。冠心病组AR发生率为16.10%（19/118）；健康对照组中AR发生率为 23.33%（27/118），差异无统计学意义（χ²=4.84,P＞0.05）。健康对照组中发生AR者尿miR-126的表达水平明显低于NAR者(0.24±0.04 vs 0.29±0.06,t=7.53, P＜0.05)；此外，尿miR-126水平降低可导致健康人AR的发生率显著增加（OR=0.50，95%CI：0.03~0.96，P＜0.05）。 结论：冠心病患者尿miR-126表达低于健康对照者，尿miR-126可以作为健康人发生AR的独立危险因素。

摘要:摘要：目的：探讨人附睾蛋白4（HE4）用于评价慢性肾脏病（CKD）患者肾功能水平的意义。 方法：采集333例非肿瘤CKD住院患者和50例表观健康人空腹静脉血，用电化学发光免疫法检测血清HE4，用全自动生化分析仪检测血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（CysC）、肌酐（Cr）、尿素（Urea）、尿酸（UA），用CKD-EPI方程估算eGFR；比较表观健康人群、CKD不同分期患者间血清HE4、CysC、Cr、Urea、UA浓度及eGFR的差异，分析HE4与CysC、Cr、Urea、UA及eGFR的相关性。 结果：血清HE4、Cr、Urea、CysC水平随CKD分期进展而增高（P均<0.05），CKD患者血清HE4水平与Cr、Urea、CysC、UA均正相关（P均<0.05），与eGFR负相关（P<0.05）。 结论：血清HE4水平可用于评价早期非肿瘤CKD患者的肾脏功能。

摘要:摘要：目的：探讨血清人附睾蛋白4（HE4）在男性肺腺癌中的诊断价值。 方法：采用电化学发光法检测78例确诊的肺癌的男性患者、同时期住院的73例男性肺良性疾病患者和40例男性体检健康者血清中HE4的水平；分析HE4在不同病理类型及TNM分期患者中表达的差异；ROC曲线分析HE4单独检测及与癌胚抗原（CEA）、细胞角蛋白19片段（Cyfra21-1）联合检测对肺腺癌的诊断价值。 结果：肺腺癌组患者HE4水平显著高于其他病理类型及肺良性疾病和体检健康者（P均<0.05）；早期肺癌（Ⅰ~Ⅱ期）、Ⅲ期、Ⅳ期肺癌患者HE4水平间差异有统计学意义（P均<0.05），早期肺癌（Ⅰ~Ⅱ期）与Ⅳ期肺癌患者HE4水平差异有统计学意义（P<0.05）。HE4单独检测诊断男性肺腺癌的敏感性（70.6%）虽不及CEA（76.5%）和Cyfra21-1（91.2%），但特异性（75.2%）显著高于CEA（72.6%）和Cyfra21-1（61.9%）。HE4与CEA、Cyfra21 1联合检测可提高诊断敏感性和特异性至97.1%和91.2%。 结论：血清HE4对于男性肺腺癌的诊断、肺癌的临床分期具有一定指导意义。HE4与CEA、Cyfra21-1联合检测可提高灵敏度和特异性，具有良好的临床应用价值。

摘要:摘要：肿瘤浸润淋巴细胞（tumor infiltrating lymphocytes, TIL）是存在于肿瘤中的一群异质性且具有抗肿瘤作用的淋巴细胞群体，其中CD8+T细胞为一种主要的效应细胞。然而,TIL在肿瘤微环境中功能缺失是导致肿瘤进展和细胞免疫治疗失败的主要因素。研究表明，TIL的抗肿瘤功能受限与特殊的肿瘤微环境及多种免疫抑制性通路相关。本文就近年来肿瘤浸润CD8+T细胞功能障碍的主要分子机制作一总结和概述。

摘要:摘要： 乳腺癌的侵袭转移是一个多因素、多步骤的复杂过程，受到多种基因的表达调控，其具体的分子机制目前尚不完全清楚。长链非编码RNA(long non coding RNA, lncRNA) 是一类转录本长度超过200 nt，缺少特异完整的开放阅读框，无蛋白质编码功能的RNA。近年来研究发现，其可在表观遗传学、转录及转录后等多种水平调控基因的表达，影响肿瘤的发生、发展、侵袭、转移及预后等进程。本文就近年来与乳腺癌侵袭转移相关的lncRNA研究进展及其分子机制作一综述，旨在为乳腺癌的早期诊断、靶向治疗、预后监控等提供新的策略。

摘要:摘要： 阿尔茨海默病(AD)从被发现到深入研究已经历了一个世纪，但由于缺乏疾病临床前期的诊断方法和有效的治疗手段，使其成为目前十大致死性疾病中唯一无法预防、治愈或延缓病程的疾病，它的危害已经作为全球性的公共卫生问题被提出。本文概述了AD的发病机制、诊断方法、治疗策略，并进一步阐述该疾病的研究进展和诊断学演变过程，以期为更好地统一早期诊断标准提供依据。

摘要:摘要：目的：用细胞膜绿色荧光探针DiO标记人骨髓间充质干细胞(hBMMSCs)，探讨其对hBMMSCs 生物学功能的影响。 方法：采用Ficoll密度梯度离心法分离、培养hBMMSCs；流式细胞术检测DiO对hBMMSCs的标记效率；通过Transwell迁移实验、平板克隆实验、生长曲线分析、成脂及成骨诱导实验分别检测DiO对hBMMSCs迁移、增殖和多向分化能力的影响。 结果：DiO对hBMMSC的标记效率可达(99.5±0.4)%；Transwell迁移实验、平板克隆实验、生长曲线分析、成脂及成骨诱导实验结果表明，与未标记hBMMSCs相比，标记后的 hBMMSCs迁移、增殖及成脂、成骨分化能力未见明显改变，差异均无统计学意义(P均＞0.05)。 结论：经DiO处理未见明显影响hBMMSCs的生物学功能，可做为安全、有效的hBMMSCs体外标记绿色荧光染料。

摘要:摘要：目的：制备可模拟真实临床标本的HPV-16和HPV-18核酸检测用质控品，并用于上海地区临床实验室的室间质量评价。 方法：分别选择整合有HPV-16和HPV-18 L1基因的宫颈癌细胞系（Siha和Hela）进行培养，收集细胞后用HPV国际标准品定值并分装，对其均匀性和稳定性进行评价，然后将样本盘发送至参评实验室，对回报结果进行分析评价。 结果：均匀性评价结果显示质控品间均匀性良好，稳定性评价结果表明质控品检测结果随时间延长无明显趋势变化。参评实验室对高浓度样本的检测符合率较高，低浓度样本的检测符合率较低。对于不分型项目，26%参评实验室由于上报假阴性结果导致出错。对于分型项目，不同检测方法的结果间没有显著差异，样本检测出错主要是因为错检或漏检某一亚型所致。 结论：制备的核酸检测用质控品的均匀性和稳定性良好，可有效用于临床实验室室间质量评价。质评结果显示上海地区参评实验室HPV核酸检测质量整体较好，个别实验室检测能力尚需提高。

摘要:摘要：目的：研制HCV RNA国家二级标准物质。 方法：用HCV阴性血清将阳性血清稀释至浓度约3.0×10⁵ IU/mL，按每支1 mL分装，真空冷冻干燥。制备后进行均匀性和稳定性检验，并做临床适用性评价。定值溯源至国际标准物质（编号06/102）。 结果：均匀性结果显示瓶间不精密度1.77%，瓶内不精密度1.40%（F=1.596 9， P>0.05）；20~25 ℃稳定14 d，2~8 ℃稳定2个月，-20 ℃稳定12个月（P>0.05）；37 ℃不稳定（P<0.05）。开瓶后放置7 d、反复冻融5次和模拟运输后检测值与对照组（-20 ℃保存）比较，差异无统计学意义（P>0.05）。定值为（1.9±0.9）×10⁵ IU/mL。 结论：制备物达到了国家二级标准物质的要求，可以作为核酸扩增检测的HCV RNA标准物质。

摘要:摘要：目的：制备性能稳定的前列腺特异抗原（prostate specific antigen，PSA）质控品，用作PSA定量检测试剂临床检测的质量控制。 方法：将人源PSA蛋白以不同稀释配方稀释成低、中、高3个浓度，制备液体和干粉两种形式的质控品，用Abbott定量检测试剂进行活性检测，考察PSA质控品的稳定性能。 结果：PSA液体质控品使用未灭活血清稀释，制备过程简单，瓶间差较低，冷藏保存可至少稳定8个月，冷冻保存可至少稳定18个月；PSA干粉质控品使用含有10%人血清、50 g/L甘氨酸和4 g/L人血清清蛋白的PBS制备，冻干粉外观均匀，复溶后澄清透明，干粉在37 ℃和复溶后25 ℃可稳定放置4周，冷藏保存至少稳定12个月。 结论：制备的PSA液体质控品和干粉质控品使用方便，稳定性能够满足室内质控要求，具有较好的市场前景。

摘要:摘要:目的：探讨美国临床和实验室标准化协会(CLSI)EP9 A3文件在血液分析仪比对中的应用价值。 方法：根据CLSI EP9-A3文件，用Sysmex XE 5000血液分析仪（XE-5000，参比系统X）和Sysmex XN-1000血液分析仪（XN-1000，待评系统Y）分别测定40份血标本，对WBC、RBC、Hb、PLT结果通过ESD法(extreme studentized deviate)进行离群值检验，选用最佳回归模型拟合回归方程，并计算各参数的95%置信区间（confidence interval，CI）和医学决定水平处的偏移，以≤1/2 TEa（国家临床检验中心室间质评允许总误差）为可接受标准。 结果：通过ESD法确认离群值，排除离群值并补充相近浓度标本后未发现离群值点。Hb、PLT差值具有恒定CV变化, 采用加权最小二乘法（weighted least squares，WLS）回归分析；WBC、RBC差值为混合变化,采用Passing Bablok回归分析；将医学决定水平分别代入回归方程，其偏移均小于可接受标准。 结论：XE-5000和XN-1000血液分析仪检测WBC、RBC、Hb、PLT结果具有可比性。

摘要:摘要：目的：调查我国血脂7项检测指标参考区间来源及上、下限分布现状。 方法：向参加2014年血脂室间质量评价的1 045家临床实验室发放调查表，通过网络在线填报的方式收集总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、载脂蛋白AⅠ（apo AⅠ）、载脂蛋白B（apo B）和脂蛋白a［Lp(a)］7个指标参考区间上、下限值，临床决定限，参考区间来源等并统计分析。 结果：共549家实验室参与回报，回报率为52.5%（549/1 045）。参考区间来源中所占比例最高的是试剂厂家说明书（54.5%～68.3%），其次是《全国临床检验操作规程》（24.0%～34.9%），实验室自己确定参考区间占3.3%～4.4%。部分指标参考区间上、下限出现交叉，上、下限及临床决定限的范围较宽。 HDL-C、apo AⅠ和apo B分别有26、25、27家实验室的参考区间按性别分组，其他指标均为未分组。分别有152、140、156和144家实验室回报了TC、TG、HDL-C和LDL-C临床决定限，中位数分别为5.70、1.70、0.91和3.37 mmol/L。有14家实验室对LDL-C “心血管病高危人群”和“极高危人群”进行了危险分层。 结论：我国大多数实验室制定血脂的参考区间时未考虑性别、年龄等因素，仅少数实验室按性别分组，进行危险分层的实验室很少。

摘要:摘要：目的：探讨临床医生对抗线粒体抗体（AMA）检测的应用情况。 方法：回顾性分析上海长征医院2011年1月至2015年8月259例AMA阳性患者信息，并在临床医生提出AMA检测要求组与未提出检测要求组之间进行比较。 结果：259例AMA阳性患者中，临床医生提出AMA检测要求的181例（占70%），没有提出AMA检测要求的78例（占30%）；确诊为原发性胆汁性肝硬化（PBC）的204例（占80%），未确诊PBC的55例（占20%）。临床医生提出AMA检测要求组感染科和消化科送检比例和PBC确诊比例均显著高于未提出AMA检测要求组（P<0.01）。在临床医生提出AMA检测要求组中，送检例数由多到少的科室依次为消化科、感染科、肝移植科、风湿免疫科和其他科室；而在临床医生未提出AMA检测要求组中，送检例数由多到少的科室依次为风湿免疫科、肾内科、神经内科、感染科、消化科和其他科室。在临床医生提出AMA检测要求组中，未确诊PBC 18例，未确诊原因包括已诊断为乙型肝炎肝硬化7例，患者不同意肝活检6例，患者失联5例。在临床医生未提出AMA检测要求组中，未确诊PBC 37例，未确诊原因包括实验诊断科未告知临床医生AMA阳性16例，患者不同意肝活检12例，患者失联6例，实验诊断科告知临床医生但后者未安排患者做进一步检查3例。 结论：消化科和感染科的临床医生对PBC的认识较为深入，较少出现忽视AMA检测的情况；但风湿免疫科、肾内科和神经内科的临床医生对PBC常常忽视AMA的检测，而这些科室AMA阳性并不罕见。

摘要: