2010, 28(4):247-249.
摘要:
2010, 28(4):252-254.
摘要:
2010, 28(4):254-254.
摘要:
2010, 28(4):255-256.
摘要:
王鑫磊 , 姚静怡 , 马建新 , 汤一苇 , 刘莉 , 卢洪洲 , 吴文娟
2010, 28(4):257-258.
摘要:目的 建立用液相芯片技术检测医院获得性呼吸道感染病原谱的方法。 方法 收集301例呼吸道感染患者的鼻咽拭子样本,利用ARM-PCR技术和Luminex xMAP技术检测鲍曼不动杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、粪肠球菌、屎肠球菌、大肠埃希菌、阴沟肠杆菌、奇异变形杆菌、白色念珠菌、克柔念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌和热带念珠菌共14 种医院获得性感染病原体和甲氧西林抗性。 结果 301例患者鼻咽拭子样本中检测出鲍曼不动杆菌137例(45.5%),铜绿假单胞菌88例(29.2%),肺炎克雷伯菌46例(15.3%),粪肠球菌24例(8%),阴沟肠杆菌21例(7%),金黄色葡萄球菌14例(4.7%),克柔念珠菌11例(3.7%),屎肠球菌8例(2.7%),奇异变形杆菌7例(2.3%),大肠埃希菌4例(1.3%),近平滑念珠菌1例(0.3%),甲氧西林抗性69例(22.9%)。 结论 液相芯片技术可用于医院获得性呼吸道感染病原谱的快速筛查。
2010, 28(4):259-261.
摘要:目的 探讨StaphPlex技术从血培养中快速鉴定葡萄球菌及其相关耐药基因的临床应用价值。 方法 用StaphPlex结合xMAP技术对含革兰阳性球菌(GPC)的血培养阳性标本作葡萄球菌鉴定及其耐药基因的分析,并与常规表型鉴定和药物敏感试验结果进行比较。用StaphPlex和实时荧光定量PCR技术分别对4株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)进行SCCmec及PVL基因检测。 结果 从23份GPC标本中快速鉴定出葡萄球菌21株(91.3%),非葡萄球菌2株(8.7%)。经细菌表型鉴定,2株非葡萄球菌1株为屎肠球菌,另1株为头状葡萄球菌。StaphPlex技术检测aacA、ermA、ermC、SCCmec和PVL基因结果与体外药物敏感试验及实时荧光定量PCR一致性良好。 结论 StaphPlex技术是一种快速准确检测血培养中葡萄球菌及其耐药基因的新技术,有较好的临床应用价值。
2010, 28(4):262-263.
摘要:目的 探讨流式荧光杂交法检测人乳头瘤病毒(HPV)基因型的应用价值。 方法 266例有不同程度宫颈疾病的患者宫颈脱落细胞标本,用流式荧光杂交技术检测HPV基因型7种低危亚型、19种高危亚型,观察各年龄段感染情况;并对其中40例标本用流式荧光杂交法与荧光定量PCR法平行检测。 结果 流式荧光杂交法共检出HPV阳性96例,总检出率为36.1%,其中单一基因型别阳性率为26.3%(70/266),多重基因型别阳性率为9.8%(26/266);26例多重基因型别阳性患者中,二重感染20例(7.5%),三重感染6例(2.3%)。26种HPV亚型共检测出13种,分别为HPV 6、11、16、18、33、31、45、52、53、58、61/73、82,常见基因型别为HPV 6、11、16、18、33、52、58。年龄在21到30岁之间的患者低危型的感染率较高,达26.0%,年龄在31到40岁之间的患者高危型的感染率高于低危型;感染的高峰年龄在21~30岁,占52.1%,31~40岁占26.0%。两种方法低危组与高危组的阳性检出率经卡方检验,P均>0.05,差异无统计学意义。 结论 流式荧光杂交法是临床HPV感染分型检测的有效方法。
王涛 , 熊衍文 , 白雪梅 , 刘凯 , 叶长芸 , 徐建国
2010, 28(4):264-266.
摘要:目的 建立一种快速、特异的检测肠出血性大肠埃希菌O157:H7菌株的多重PCR方法。 方法 针对O157:H7菌株的O157、H7抗原特异基因rfbE O157、fliC H7以及stx1、stx2、eaeA和hlyA四种毒力基因设计相应引物,在同一扩增体系中进行PCR反应,通过优化多重PCR 反应条件和循环参数,建立检测O157:H7菌株的多重PCR方法,并测定其特异性和灵敏度。 结果 6 对特异性引物各自扩增相应的基因片段,检测结果与常规PCR 获得的结果一致。细菌纯培养物的检测灵敏度为1.33×104 CFU。 结论 该多重PCR方法能在一次检测中同时反映待测菌株是否为肠出血性大肠埃希菌O157:H7及其携带毒力基因的情况,可为O157:H7大肠埃希菌感染的诊断及流行病学调查提供一种简便、快速的检测手段。
陈淑莲 , 李向东 , 李灵俊 , 曾昭伟 , 李会强 , 王学谦
2010, 28(4):267-268.
摘要:目的 研制生物素-亲合素间接包被ELISA法定量检测血清游离β-HCG试剂盒。 方法 用生物素化牛血清清蛋白和链霉亲合素包被微孔反应板,生物素化抗游离β-HCG抗体和酶标记抗游离β-HCG抗体检测游离β-HCG,评价试剂盒相关技术参数。 结果 本试剂盒具有较好的稳定性,灵敏度0.1 ng/ml,回收率95.9%~102.5%,批内CV 7.5%~11.1%,批间CV12.5%~18.1%,与FSH、TSH、LH和α-HCG的交叉反应率均<0.1%,检测范围0.1~500 ng/ml,与美国DRG公司试剂盒的相关系数r2=0.789 2,P<0.05。 结论 本方法研制的试剂盒灵敏度高,特异性好,操作方法简便,适于临床常规应用。
党华 , 黄志坚 , 邱于斌 , 雷均平 , 甘嘉裕 , 陈志强 , 曾志 , 梁伟英 , 肖继前
2010, 28(4):269-270.
摘要:目的 研制变应原特异性IgE抗体检测试剂盒。 方法 采用广州地区变应原作为包被抗原,在传统间接ELISA法基础上进行了改良,结合生物素-亲合素系统,建立快速、敏感、特异、重复性好的变应原特异性IgE抗体检测试剂盒,并对其各项指标进行评价。 结果 研制的试剂盒最低检出限为0.35 IU/ml,批内、批间的变异系数(CV)均<10%,稳定性良好,与Pharmacia公司CAP系统的检测结果相关性高。 结论 试剂盒各项指标均达到临床检测要求,适于临床检测和科研应用。
2010, 28(4):271-272.
摘要:目的 评价实时荧光核酸恒温扩增技术(simultaneous amplification and testing, SAT)检测沙眼衣原体(CT)核酸试剂盒(RNA恒温扩增)的敏感性和特异性。 方法 对229例临床疑似患者的尿样及拭子标本同时进行SAT检测和“金标准”沙眼衣原体细胞培养检测,检测结果有差异的标本采用PCR方法对拭子标本进行复测,根据实验结果评估SAT技术在尿样及拭子标本检测中的敏感性和特异性。 结果 结合细胞培养和PCR的实验结果作为“扩大金标准”,得出SAT技术对临床拭子标本的检测敏感性为97.1%,特异性为100%;对尿样标本检测的敏感性为89.4%,特异性为99.2%。拭子和尿样标本检测结果的符合率为95.2%,经卡方检验,差异无显著性(χ2=3.27,P>0.05)。 结论 SAT技术检测CT试剂盒对拭子及尿样标本敏感性及特异性均较好,适用于临床实验室对CT的检测。
王敏 , 李先平 , 向清文 , 周勇 , 曹虹 , 陈进伟
2010, 28(4):273-275.
摘要:目的 从噬菌体随机12肽库中筛选系统性红斑狼疮(SLE)自身抗原模拟肽分子并初步研究其诊断价值。 方法 首先用自健康人血清提取的IgG作为固相配基吸除非特异性噬菌体,再以自SLE患者血清提取的IgG包被,按吸附-洗脱-扩增的淘洗过程对上述处理过的噬菌体液进行3轮筛选,随机挑取噬菌体克隆,用ELISA检测其特异性。用混合阳性克隆包被的ELISA法检测SLE、类风湿关节炎(RA)、骨关节炎(OA)患者及健康对照血清与混合阳性克隆的结合力。 结果 经过3轮筛选,回收率从4.4×10-5增加到1.4×10-2,得到良好的富集效果。第3轮洗脱物中挑选出的22个克隆中,19个克隆与SLE患者血清IgG具有较强的结合力。用第3轮的混合噬菌体克隆检测SLE、RA、OA患者及健康对照的血清,阳性率分别为80.0%、15.0%、0和0。 结论 成功利用噬菌体12肽库对SLE患者血清进行了模拟肽筛选,得到的模拟肽分子用于ELISA,对SLE具有一定的诊断价值。
2010, 28(4):276-278.
摘要:目的 检测血清载脂蛋白A5(apoA5)水平,分析apoA5浓度与血脂、冠心病的关系,探讨其在冠心病发生中的作用。 方法 收集150例冠心病患者和104例健康体检者血清用自动生化分析仪检测血脂,双抗体夹心ELISA法检测apoA5水平。 结果 稳定型心绞痛患者血清apoA5浓度为(209.8±52.6)ng/ml,显著低于健康对照组(231.5±57.0)ng/ml,P<0.05。在校正血脂、年龄等因素后,这种关系仍然存在。稳定型心绞痛组女性血清apoA5浓度比男性高[(239.8±53.1)ng/ml vs(194.5±41.7)ng/ml],P<0.05。总人群中,apoA5浓度与年龄(r=-0.24)、TG(r=-0.27)、TC(r=-0.19)、Lp(a)(r=-0.17)呈负相关,与HDL-C呈正相关(r=0.36)。急性冠脉综合征组血清apoA5浓度为(248.6±54.4)ng/ml,显著高于稳定型心绞痛组(209.8±52.6)ng/ml,P<0.01。 结论 本研究证实apoA5浓度与血TG、Lp(a)和冠心病呈负相关,apoA5是冠心病独立的保护性预测因子。
2010, 28(4):279-280.
摘要:目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者阿德福韦酯(ADV)抗病毒治疗前后ADV对机体免疫功能的影响。 方法 收集37例ADV抗病毒治疗有效的CHB患者治疗前、治疗3个月、6个月和1年时血清,ELISA检测IL-12、IFN-γ、IL-4和IL-10水平。 结果 37例CHB患者ADV治疗后各时间点IL-12和IFN-γ水平均显著高于治疗前(P<0.05)和健康对照组(P<0.05),以治疗3个月时最高,后逐渐降低;IL-4和IL-10治疗后各时间点均显著低于治疗前(P<0.05),高于健康对照组(P<0.05),以治疗6个月时最低,1年时稍有增高,但无统计学意义(P>0.05)。 结论 ADV治疗可促进CHB患者产生更多的TH1型细胞因子,使TH1/TH2比值趋于平衡,促进了机体免疫功能的增强和恢复。
2010, 28(4):281-282.
摘要:目的 探讨巢式RT-PCR技术在检测急性早幼粒细胞白血病(APL)患者PML/RARα融合基因的价值。 方法 采用巢式RT-PCR检测218例初诊为APL患者的PML/RARα融合基因的表达水平及在部分患者的动态变化;随机选择39例APL完全缓解(CR)的患者,分别用流式细胞术(FCM)和巢式RT-PCR监测外周血或骨髓中的微小残留病(MRD)白血病细胞。 结果 在确诊的167例APL患者中PML/RARα融合基因阳性率为90.4%(151/167);39例APL-CR患者中PML/RARα融合基因阳性率76.9%(30/39);FCM和巢式RT-PCR监测APL-CR患者MRD有很好的一致性(P>0.05)。 结论 巢式RT-PCR对APL的诊断有高灵敏度和高特异性;对APL的疗效及预后判断有重要临床意义。
杨福坤 , 林旎 , 戴琳孙 , 江凌 , 陈勇 , 程祖建 , 欧启水
2010, 28(4):283-284.
摘要:目的 定量检测新生隐球菌(Cryptococcus neoformans,CN)的荚膜相关蛋白10(capsule associated protein 10,CAP10)基因mRNA,探索将其用于隐球菌性脑膜炎抗真菌药物疗效评估的可行性。 方法 构建重组质粒标准品pGEMT-Easy-CAP10并制作标准曲线;建立荧光定量PCR(fluorescent quantitative PCR, FQ-PCR)反应体系并对其进行评价。利用建立的FQ-PCR体系检测11例氟康唑联用5-氟胞嘧啶治疗、9例两性霉素B联用5-氟胞嘧啶治疗患者治疗前后脑脊液(CSF)CAP10 mRNA拷贝数的变化,并结合临床资料进行分析。 结果 建立的FQ-PCR体系适合于CAP10 mRNA拷贝数的测定。两性霉素B联合5-氟胞嘧啶治疗组CAP10 mRNA的拷贝数的log值治疗前为3.43±0.84,治疗后下降为2.35±0.85(P<0.05);氟康唑联合5-氟胞嘧啶治疗组治疗前为2.65±1.24,治疗后下降为1.84±1.07(P<0.05)。2组患者临床症状均明显改善。 结论 构建的新生隐球菌CAP10 mRNA的FQ-PCR定量检测体系适合于脑脊液标本的检测,为新生隐球菌感染患者抗真菌药物疗效的判断提供了新的依据。
2010, 28(4):285-286.
摘要:目的 探讨幽门螺杆菌(Hp)感染对冠心病(CHD)患者血清高半胱氨酸(Hcy)和C反应蛋白(CRP)的影响,探讨其与CHD的关系。 方法 应用酶联免疫吸附试验法测定152例CHD患者和101例健康体检者血清抗Hp抗体(抗Hp-IgG),同时进行血清CRP和Hcy的检测,并对抗Hp-IgG阳性组与抗Hp-IgG阴性组进行对比分析。 结果 CHD组血清抗Hp-IgG阳性率明显高于非CHD组(P<0.05);CHD组Hcy、CRP含量显著高于对照组(P<0.05),且随着病情进展,Hcy、CRP含量逐渐增高;抗Hp-IgG阳性的CHD患者血清Hcy、CRP 浓度也明显高于抗Hp-IgG阴性CHD组(P<0.05)。 结论 Hp感染诱发炎症使Hcy、CRP水平升高,并促进冠心病发展。
2010, 28(4):287-288.
摘要:目的 探讨人乳头瘤病毒(HPV)基因分型在宫颈病变筛查中的临床意义,以及HPV感染与宫颈病变的关系。 方法 对278名患者采用导流杂交技术检测HPV的21个分型,除58例宫颈膜式超薄细胞学检查正常者外,其余均行阴道镜下组织活检,分析HPV检测结果与宫颈病变的关系。 结果 278例患者HPV阳性率61.2%,以高危型感染最多见,感染率前6位依次为:HPV16,58,52,31,68,11。对照组(正常或炎症组)的HPV感染率明显低于各宫颈病变组;除宫颈癌组外,对照组多重HPV感染率明显低于其他宫颈病变组;宫颈上皮内瘤变(CIN)组和宫颈癌组的16型感染率显著高于其他各组(P均<0.05)。 结论 结合HPV分型检测可提高宫颈病变的筛查能力,HPV尤其是高危16型的感染与宫颈恶性病变的发生、发展密切相关。
2010, 28(4):289-290.
摘要:目的 观察婴幼儿感染人巨细胞病毒(HCMV)对肾脏的早期损伤。 方法 分别收集20例健康婴儿、21例HCMV潜伏感染和27例活动性感染婴幼儿尿液标本,用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测尿HCMV-DNA载量;速率散射比浊法测定尿微量清蛋白(MA)和转铁蛋白(Tf);苦味酸速率法测定尿肌酐(Cr);速率法测定尿N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(NAG)和γ-谷氨酰转移酶(GGT)的活性。 结果 健康婴儿对照组、HCMV潜伏感染组和活动性感染组间尿液中MA(F=1.740,P>0.05)和Tf(F=0.160,P>0.05)水平差异无统计学意义;活动性感染组尿GGT和NAG活性与健康婴儿对照组、潜伏感染组间差异有统计学意义(P<0.05);HCMV感染患儿尿GGT、NAG活性与HCMV DNA载量的对数值均无相关性(r分别为0.098和0.201,P均>0.05)。 结论 HCMV感染患儿尿液中GGT和NAG活性的测定有助于临床早期肾损伤的判断。
2010, 28(4):291-293.
摘要:目的 研究阿司匹林是否通过阻断核因子-κB(NF-κB)信号通路对胃癌细胞AGS增殖及周期产生影响。 方法 培养胃癌细胞株AGS,MTT法检测阿司匹林在不同浓度和不同作用时间下对AGS细胞增殖的影响;流式细胞术检测阿司匹林对细胞周期的影响;western blotting 和免疫荧光法检测阿司匹林对AGS细胞 NF-κB p65表达的影响。 结果 阿司匹林在0.1~10 mmol/L浓度区间内,随浓度增加和时间延长,对AGS细胞的抑制率逐渐增加。细胞周期中DNA合成前期(G0/G1期)的细胞比例增加,DNA合成期(S期)细胞比例下降。随阿司匹林浓度增加和作用时间延长,AGS细胞 NF-κB p65的表达渐降。 结论 阿司匹林抑制胃癌细胞AGS的增殖, 诱导细胞G0/G1期阻滞,其作用机制可能是通过阻断NF-κB信号通路实现的。
2010, 28(4):294-295.
摘要:目的 检测多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者血清可溶性主要组织相容性复合物Ⅰ类相关链A(soluble MICA, sMICA)和天然杀伤(NK)细胞表面NKG2D(naturalkiller group 2,member D)受体表达的关系。 方法 ELISA法检测38例MM患者和40例健康人对照的血清sMICA含量,流式细胞术检测外周血NK细胞表面NKG2D受体的表达。 结果 MM患者血清sMICA为(458±207)pg/ml显著高于健康对照组(135±82)pg/ml(t=9.133,P<0.01);Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期MM患者血清sMICA(pg/ml)分别为258±126、489±191和585±163,Ⅱ期和Ⅲ期均高于Ⅰ期患者(t分别为3.377和5.172,P均<0.01)。回归分析显示MM患者血清sMICA含量与外周血NK细胞表面NKG2D受体水平呈负相关(r=-0.749,P<0.01)。 结论 MM患者血清sMICA含量变化与该病的发生及疾病活动性有一定关联。
2010, 28(4):296-297.
摘要:目的 探讨多发性骨髓瘤(MM)患者瘤细胞中第10号染色体磷酸酶和张力蛋白同源缺失性基因(PTEN)蛋白、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及转化生长因子β1(TGF-β1)的表达,分析其在疾病中的意义。 方法 用免疫组化SP法测定49例MM患者、30例对照及26例化疗有效患者PTEN、VEGF、bFGF及 TGF-β1的表达,应用卡方检验分析。 结果 MM 患者PTEN及TGF-β1的表达显著低于对照组及化疗有效组(P<0.05),而VEGF、bFGF的表达显著高于对照组及化疗有效组(P<0.05);MM Ⅰ+Ⅱ期组VEGF、bFGF表达率显著低于Ⅲ期组(P<0.05),而Ⅰ+Ⅱ期组PTEN、TGF-β1显著高于Ⅲ期组(P<0.05)。 结论 PTEN、VEGF、bFGF及TGF-β1的异常表达可能在疾病的发展中起一定的作用,三者联合检测有助于判断疾病分期及预后。
2010, 28(4):298-300.
摘要:
王萍 , 陈寅 , 穆晓燕 , 孙静 , 杨庆红 , 李会强
2010, 28(4):305-307.
摘要:目的 评价3种鸡蛋清过敏原提取方法,为临床检测sIgE提供最佳抗原提取方案。 方法 分别用丙酮沉淀法、硫酸铵盐析法、碳酸氢钠溶解法粗提鸡蛋清蛋白,用BCA法测定蛋白质浓度,并通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹方法分别鉴定分离蛋清的蛋白质组分和免疫活性,并进行20例鸡蛋过敏患者血清的分析。 结果 每100 ml蛋清用3种方法提取的蛋白质总量分别为1.5 g、1.8 g、5.2 g。免疫印迹法检测显示,蛋清与鸡蛋过敏患者的阳性血清有2条反应条带,分子量接近72 000和17 000。碳酸氢钠溶解法提取的蛋清蛋白质与20例阳性病人血清反应均出现2条反应带,其他方法提取的蛋白质在部分病例中未出现反应带。 结论 3种提取方法各有特点,碳酸氢钠溶解法操作简单、收获量高,蛋白质组分完全,能够满足临床检测蛋清sIgE的实验要求。
2010, 28(4):308-309.
摘要:目的 探讨不同荧光定量PCR仪检测肝炎病毒 DNA 及RNA结果的一致性。 方法 参照美国NCCLS EP9-A2文件,以MJ Opticon 2为参比仪器,ABI 7300为实验仪器,检测HBV DNA 及 HCV RNA,分析结果的相关性及预期偏倚,评价两种仪器检测结果的一致性。 结果 MJ Opticon 2 及ABI 7300检测HBV DNA 及 HCV RNA具有良好的相关性 (rHBV=0.995;rHCV=0.993),预期偏差在可接受范围内。 结论 MJ Opticon 2 及ABI 7300检测结果具有较好的一致性,可用于同时检测HBV DNA或HCV DNA。
2010, 28(4):310-311.
摘要:目的 评价Ct值和浓度对数两种参数对临床HBV核酸定量检测室内质控结果分析的影响。 方法 分别以室内质控品Ct值和浓度对数的均值绘制Levery-Jennings质控图。以1 2S为“告警”规则,1 3S为失控规则。 结果 以Ct值为参数分析质控结果时未发现失控;而以质控品浓度对数为参数分析质控结果时出现一个批次的失控结果。 结论 以质控品浓度对数为参数分析室内质控,较Ct值更为敏感,可以更好地保证临床核酸定量检测质量。
2010, 28(4):312-314.
摘要:目的 了解I类整合子在合肥地区革兰阴性杆菌中的分布状况,研究其整合的基因盒结构。 方法 PCR扩增I类整合子整合酶基因及其基因盒可变区和3′保守区,可变区产物进行测序分析。 结果 739株临床分离革兰阴性杆菌中,I类整合酶基因(IntI1)阳性菌株为399株(54.0%);随机抽取的80株IntI1阳性菌中64株扩增出长度不等的9种基因盒产物,它们在所测的细菌中大致有17种不同的组合模式;77株扩增出3′保守区预期产物。出现频率较高的2种I类整合子基因盒可变区产物分别为dfrA15和aadA2,片段最长的基因盒可变区产物为aadB、aadA1和cmlA6。 结论 I类整合子在合肥地区临床分离革兰阴性杆菌中广泛分布,其整合的基因盒种类多样且在不同菌株中呈多种组合模式。
蔡豪斌 , 何雨 , 陈智平 , 秦雪 , 李山 , 杨侃 , 李玉秀 , 王丽兰 , 阳艳华 , 阳晶
2010, 28(4):315-316.
摘要:目的 调查孕妇、新生儿、肾病患者、肾移植受者及健康体检者尿中BK病毒阳性率。 方法 用PCR技术检测研究对象晨尿中BK病毒DNA。 结果 孕妇、新生儿、肾病患者、肾移植受者及健康体检者尿中BK病毒DNA阳性率依次为9.87%、3.77%、2.39%、18.75%、2.22%。与健康人阳性率相比,孕妇与肾移植受者阳性率显著升高(P值分别<0.05和0.01)。 结论 BK病毒DNA在健康人群的尿中检出率较低,在孕妇及肾移植受者中阳性率较高,但其临床意义尚需进一步研究。
2010, 28(4):318-318.
摘要: